انتشر اختبار RT-PCR (في الأنف) على نطاق واسع مع وباء Covid-19. و قد اعتمد هذا الفحص بشكل شبه مطلق للكشف عن الاصابة بفايروس كورونا المستجدّ ، وهو الأكثر موثوقية للكشف عن العدوى. متى تفعل ذلك و أين ؟ ما هو معدل كفاءة هذا الفحص؟ ما معنى كلمة “PCR”؟ ما هو الفحص؟ كل شيء عن هذا الاختبار سوف نتناوله في هذه المقالة.
اختبار PCR: ما هو؟
قبل البدء بشرح ماهية اختبار ال PCR علينا أن نشير الى أنّ فايروس كورونا المستجدّ يحمل المعلومات الجينية بشكل RNA .
: Rt-PCR (reverse transcriptase)
Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction هو اختبار تشخيصي جزيئي (Molecular diagnostics). يتم إجراء معظم اختبارات تفاعل البوليميراز المتسلسل على العينات التي تم جمعها باستخدام مسحات الأنف. يمكن اختبار إفرازات الأنف أو الدم أو اللعاب أو البول أو حتى السائل الأمنيوسي بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل. ثم يتم تحليل العينات باستخدام طريقة تسمى تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، والتي تكتشف الحمض النووي الريبي للفيروس ARN: الجينوم الذي يسمح بالتعرف عليه. لا يمكن أن يبدأ البحث بدون هذه القطعة من الشفرة الجينية الخاصة بكل فيروس.
https://www.facebook.com/newslbcom/
تابعنا على فيسبوك
ال PCR ثورة في علم الجينات
قد أحدثت تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل ثورة في البيولوجيا الجزيئية وعلم الوراثة ، كما تقول جاكلين مارفيل ، الدكتورة في المناعة والخلايا الليمفاوية السامة للخلايا في المركز الدولي لأبحاث الأمراض المعدية في ليون. إنها تسمح للباحثين بتضخيم كل ما هو جينومي ، الحمض النووي الريبي RNA أو الحمض النووي DNA لتحليله. إنه يبحث عن تسلسل جيني محدد: فيروس ، طفرة ، أو أشياء أخرى. بمجرد العثور على خصائص الحمض النووي ، يتم نسخه “، لأن كميات كبيرة من عينة الحمض النووي مطلوبة للتحليلات الجزيئية والجينية. تكاد تكون دراسات قطع الحمض النووي المعزولة مستحيلة بدون تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل. لتضخيم جزء أو ذراع من الحمض النووي باستخدام PCR ، يتم تسخين العينة أولاً بحيث ينفصل الحمض النووي إلى قطعتين من الحمض النووي المفرد الذي تقطعت به السبل. ثم يبني إنزيم يسمى “بوليميراز طاق” شريطين جديدين من الحمض النووي ، باستخدام الخيوط الأصلية كقوالب وما إلى ذلك. يوضح العالم: “مع كل دورة نقوم بتضخيمها ، ونضاعف الجزيئات”. وتؤدي هذه العملية إلى تكرار الحمض النووي الأصلي ، ويحتوي كل جزيء جديد على خيط DNA قديم وجديد. ويعيد الحمض النووي الجديد نفسه ، مما يؤدي إلى إلى أكثر من مليار نسخة طبق الأصل من شريحة الحمض النووي الأصلية. يمكن تطبيق تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في تشخيص المرض أو على العامل المسبب للمرض ، والذي تم تحديده بواسطة الحمض النووي الخاص به. يمكن أيضًا تطبيقه على تحقيقات الطب الشرعي عند العثور على آثار الحمض النووي في مسرح الجريمة (الشعر ، سوائل الجسم) ؛ أو علم الآثار. كما أنها تستخدم في الهندسة الوراثية لإدخال الجينات في الأنواع الجديدة.
ما مدى مصداقيّة فحص ال PCR ؟
يمكن أن تكون اختبارات ال PCR دقيقة للغاية ، حيث تكشف عن الفيروس بنسبة 95٪ من الوقت. الخصوصية العالية للطرق الجزيئية هي أيضًا نقطة ضعفها. وبالتالي ، قد يتم اكتشاف نوع جديد من الفيروسات أو البكتيريا بشكل جيد ، أو حتى يتفادى التضخيم تمامًا. كان هذا هو الحال ، على سبيل المثال ، خلال جائحة الأنفلونزا عام 2009 ، حيث لم تكتشف بعض الاختبارات الفيروس الجديد وفي بداية جائحة Covid-19. “الأمر متروك للمختبرات لمراجعة خصائص الاختبارات المستخدمة ، ومقارنتها بالبيانات الجينية المتاحة وتكييفها مع المتغيرات الجديدة”. في حالات أخرى ، ليكون فحص ال PCR موثوق ، يجب نقل عينات الدم إلى المختبر في غضون فترة زمنية قصيرة (أقل من 4 ساعات) ، وفي درجة حرارة معينة. إذا لم يتم الوفاء بالموعد النهائي ، فسيتم طردهم ثم تجميدهم. الحمض النووي DNA هو أكثر استقرارًا فمن الممكن حتى تحليله من الدم المترسب على الورق النشاف. يمكن أن تتأثر هذه التقنيات أيضًا بظروف التخزين والنقل. لذلك تتوفر ال “kits” القياسية (القشّة التي يتمّ إدخالها في الأنف لسحب العيّنات) ، مما يقلل من المخاطر المختلفة. “تقنيات PCR في الوقت الحقيقي حلت الآن محل تقنيات PCR التقليدية (تسمى نقطة النهاية) لأنها أكثر حساسية ، وأكثر دقة ، وأكثر قابلية للتكرار ومناسبة للسلسلة الكبيرة ،” يحدد . يتيح PCR في الوقت الفعلي إمكانية تضخيم الجين محل الاهتمام (و هنا نشير الى الجين الذي يحمله فايروس كورونا المستجدّ) في وقت واحد وتحليل منتجات التضخيم ، مما يقلل من مدة الاختبار مقارنةً بمدة اختبار PCR التقليدي. يتم أيضًا تقليل مخاطر النتائج الإيجابية الزائفة عن طريق التلوث باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي مقارنةً بتفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي. يتم الحصول على النتائج بسرعة ، ويمكن أن تكون متاحة في أقل من ثلاث ساعات (من الاستخراج إلى الحصول على النتائج).
أهميّة ال PCR
يوصّى باختبار PCR في البحث عن الالتهابات الفيروسية والبكتيرية ، ولكن أيضًا في تشخيص الاضطرابات الوراثية أو البحث عن بصمات الحمض النووي. وكلما زاد التعبير عن جين (الفيروس) ، زاد عدد جزيئات الحمض النووي الريبي (RNA) بأعداد كبيرة.
- فيروس نقص المناعة البشرية ، الإيدز: من اليوم العاشر بعد الإصابة ، يصبح فيروس نقص المناعة البشرية قابلاً للاكتشاف ، ولا سيما عن طريق اختبار RT-PCR أو عن طريق قياس الحمل الفيروسي. بالنسبة للأطفال الذين تقل أعمارهم عن 18 شهرًا ، فإن اختبارات تفاعل البوليميراز المتسلسل (التي تبحث عن الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي الفيروسي) هي الوحيدة التي يمكن استخدامها بسبب احتمال وجود الأجسام المضادة للأم. يمكن أن تكون العينة دمًا أو لعابًا.
- تم البحث عن عدوى الفيروس الخلقي عن طريق اختبار PCR في السائل الأمنيوسي عند النساء الحوامل قبل الولادة في غضون ثلاثة أسابيع من الولادة عن طريق اختبار الفيروس عن طريق PCR في بول أو لعاب الوليد.
- الهربس: يمكن تشخيص هذا الانتفاخ على الجلد (الطفح الحويصلي) والأغشية المخاطية (التهاب اللثة والهربس التناسلي) والعين (الملتحمة والتهاب القرنية) والجهاز العصبي المركزي (التهاب السحايا والتهاب السحايا والدماغ) من آفة الجلد المسحة أو الغشاء المخاطي وتحليلها عن طريق اختبار PCR. الهدف الرئيسي من علم الأمصال النوعي – الذي يجعل من الممكن التمييز بين نوع HSV1 و HSV2 من النوع IgGs – هو منع المواقف المعرضة لخطر تلوث النساء الحوامل أو انتقال فيروس HSV من الأم إلى الطفل.
- الطفيليات: يعد اكتشافPCR مفيدًا للعديد من أنواع العدوى الطفيلية مثل داء المقوسات وداء الليشمانيات أو الملاريا من عينة الدم.
- التهاب الكبد الفيروسي الحاد: يمكن أن يكون التهاب الكبد A و E و PCR مفيدًا في بعض حالات العدوى المبكرة ، قبل أن يتم اكتشاف الأجسام المضادة ، أو يكون مفيدًا بالإضافة إلى اختبار آخر. من الضروري جمع البلازما أو البراز.
ال PCR و ال covid19
PCR هو المعيار الذهبي لتشخيص المرحلة الحادة من Covid-19. يجعل من الممكن اكتشاف وجود فيروس SARS-CoV-2 في جسم الفرد في وقت محدّد وبالتالي تأكيد تشخيص Covid-19 الذي أجراه الطبيب. العينة المثلى هي البلعوم الأنفي. يمكن أخذ عينات أخرى (اللعاب على سبيل المثال) في الاعتبار لتحديد التشخيص. يعدّهذا الفحص دقيق جدّا فهو يحدّد وجود الفايروس أو عدمه بنسبة 95%.
متى نلجأ الى فحص ال PCR ؟
في ظلّ جائحة كورونا ينصح الخبراء باجراء فحص ال PCR في الحالات التّالية :
- المريض بين اليوم الأوّل و اليوم الرابع بعد ظهور الأعراض: قم بإجراء اختبار (antigene) على عينة من البلعوم الأنفي. إذا كانت نتيجة اختبار المستضد (antigene) سلبية وكان عمر المريض 65 عامًا أو أكثر و / أو عامل الخطر حاد من الاصابة ب Covid-19 ، فأعد الاختبار بواسطة RT-PCR على مسحة من البلعوم الأنفي.
- المريض بين اليوم الرابع و اليوم السابع بعد ظهور الأعراض:يجب القيام ب اختبار RT-PCR على عينة من البلعوم الأنفي. يجب إجراء الاختبار في أقرب وقت ممكن من الوصفة الطبية.
- الشخص المخالط لشخص مصاب و ذلك خلال مدة تتراوح بين اليوم الخامس و اليوم السابع للمخالطة.
مسار الفحص
يمكن إجراء اختبارPCR للفيروسات باستخدام سوائل الجسم المختلفة. يمكن أخذ: دم ، عن طريق فحص الدم أو جمع قطرة دم على ورق نشاف ، أو لعاب ، أو إفرازات أنفية على مسحة أو بول على شريط ، أو براز يتم جمعه في حاوية معقمة أو عظام مأخوذة من الخزعة. العينة الكافية ضرورية أيضًا لضمان جودة التحليل” ، عادة: اللطاخة الأنفية البلعومية لاكتشاف فيروس الأنفلونزا تكون مثالية فقط إذا تم إجراؤها بشكل صحيح (مسحة عميقة) وفي الوقت المناسب.
بشكل ملموس ، في البحث عن مرض كوفيد -19 ، يتم جمع عينات من البلعوم الأنفي من الأشخاص الذين تظهر عليهم أعراض المرض عن طريق مسحة يتم إدخالها في فتحة الأنف إلى البلعوم الأنفي أو في الجهاز التنفسي العلوي. يمكن أيضًا أخذ العينة في حالات معينة من الجهاز التنفسي السفلي (البلغم أو السائل القصبي السنخي). في الوقت الحالي ، الوقت المثالي لاكتشاف الحمض النووي الريبي الفيروسي لـ Covid-19 (Sars-CoV-2) بين يوم إلى 7 أيام بعد ظهور الأعراض. أبعد من ذلك ، فإن العينة الأنفية البلعومية لم تعد مثالية “تشير إلى ذلك الهيئة العليا للصحة (HAS) في تقريرها.
في سياق جائحة كوفيد -19 ، تكون نتيجة اختبار PCR متاحة بشكل عام في غضون 24 ساعة من أخذ العينة ، وأحيانًا 48 ساعة حسب المختبرات.
تحليل نتائج الفحص
تفسير نتائج PCR صعب. يتم إرجاع النتيجة بالمؤشر “إيجابي” أو “سلبي” بالنسبة للمريض ، بينما تظهر على شكل “شريط” ، مع شرائط بيضاء مرئية تمثل شظايا من الحمض النووي للفيروس بحجم محدد بالنسبة لهم. ومع ذلك ، فإن “المعرفة بأداة الاختبار المستخدمة ضرورية للتفسير التحليلي” تشير إلى الخبير ، سواء كانت مجموعة تجارية أو PCR طورها مختبر التشخيص. تتمتع المجموعات التجارية بميزة الموافقة عليها. لذلك ، من الضروري أن يعرف الطبيب خصائص طرق PCR المستخدمة من قبل المختبر الذي يقوم بإجراء التحليل أو الحصول على نتيجة مصحوبة بتعليق لتفسير النتيجة. بالإضافة إلى الاكتشاف البسيط ، تتيح الطرق الجزيئية الحديثة أيضًا إعطاء مؤشرات كميّة ، على سبيل المثال لمتابعة تطور الحمل الفيروسي لفيروسات HIV أو التهاب الكبد C تحت العلاج ، وبالتالي اكتشاف ظهور سلالات مقاومة.
اقرأ أيضا
نيويورك : سلالة جديدة من فيروس كورونا المستجد، تنتشر بشكل سريع في مدينة نيويورك !
قم بكتابة اول تعليق